单一的Annexin V检测虽然能灵敏地识别磷脂酰丝氨酸（PS）外翻，但无法区分引发这一变化的具体细胞状态。例如，细胞凋亡晚期或膜完整性受损的细胞也会出现PS外翻。为了对细胞群体进行更精细的“分型”，科研实践中常将Annexin V与另一种染料——碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）联合使用，形成经典的Annexin V/PI双染法。
PI是一种膜不通透性的核酸染料。它的关键在于其进入细胞的“门槛”：只有细胞膜完整性丧失时，PI才能穿过细胞膜进入细胞核，与DNA结合并发出红色荧光。而对于细胞膜结构完整的活细胞或早期凋亡细胞，PI则被有效地阻挡在外。这一特性与Annexin V对PS的检测形成了完美互补。
通过流式细胞术同时分析Annexin V（通常为绿色荧光，如FITC通道）和PI（红色荧光）的信号，可以将细胞清晰地区分为四个功能亚群：
Annexin V- / PI- （双阴性）：代表细胞膜PS未外翻且结构完整的活细胞。 Annexin V+ / PI- （单阳性）：这是双染法的核心价值所在，代表PS已外翻但细胞膜仍保持完整的早期凋亡细胞。这是研究细胞凋亡启动和药物早期效应的关键群体。 Annexin V+ / PI+ （双阳性）：代表PS外翻且膜完整性已丧失的细胞，通常指晚期凋亡细胞，也可能包含部分继发性膜损伤的细胞。 Annexin V- / PI+ （单阳性）：通常数量较少，可能代表在样本处理过程中发生单纯膜损伤的细胞，或检测时的裸核状态。展开剩余39%这种分型策略使得研究者不仅能判断细胞是否发生了PS外翻，更能精确评估细胞所处的具体阶段，从而对实验干预（如药物处理、基因敲除）的效果进行动态、精细的量化分析。例如，在药物筛选中，观察早期凋亡细胞（Annexin V+/PI-）比例的增加，是鉴定其促凋亡活性的直接证据。
实现清晰、锐利的分群，是数据准确性的前提。亚科因生物（ABBKINE）提供的Annexin V/PI双染试剂盒（如KTA0002， KTA0005， KTA0006）正是为此优化设计。
试剂盒采用高纯度、高活性的荧光标记Annexin V及最适浓度的PI，配合专用的结合缓冲液，确保染色特异性强、背景低。如图1所示（参考文档中Jurkat细胞流式图），使用ABBKINE试剂盒能获得象限分明的流式图谱，轻松区分不同细胞状态。其产品设计充分体现了ABBKINE “赋能细胞研究与治疗” 的使命，通过提供可靠的工具，帮助研究者将复杂的细胞群体解析得清清楚楚，让数据自己说话。
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